FIN DE SEMESTRE......

Al concluir el semestre nos llevamos muchas sorpresas y un aprendizaje nuevo, ya que las cosas que aprendimos, los conocimientos que adquirimos fueron bastantes y nutritivos, le damos las gracias a nuestra profesora por estar siempre con nosotros y en cada paso siempre estuvo allí, asimismo a mi equipo de trabajo que juntos sacábamos el trabajo día a día. solo esperamos que para el próximo semestre podamos seguir todos juntos y seguir adquiriendo mas conocimiento. GRACIAS..

Preparación de medios de cultivo sólidos y líquidos

Práctica No.4

Preparación de medios de cultivo sólidos y líquidos

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial, éste debe reunir una serie de condiciones tales como: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

Clasificación de medios de cultivo:

• Según su estado físico:

Líquidos

Usualmente se denominan caldos ya que contienen los nutrientes disueltos en agua. Permiten obtener suspensiones con un elevado número de microorganismos. Ejemplo. Caldo nutritivo.

Sólidos

Se pueden preparar a partir de medios líquidos a los cuales se les añaden agentes solidificante como agar, gelatina o sílica gel. Se utilizan con frecuencia en el aislamiento y mantenimiento de los microorganismos en el laboratorio. Ejemplo. Agar nutritivo.

El gelificante más usado es el agar-agar, extraído de las algas rojas (ej.: Gelidium), del cual existen versiones más o menos purificadas. Las más puras que se enriquecen con el polisacárido agarosa para evitar la introducción de sustancias “contaminantes” inadvertidas que falseen las interpretaciones sobre el comportamiento nutricional del microorganismo; son las que se emplean para los medios definidos (Ver más abajo). El agar presenta la gran ventaja de que una vez gelificado, no funde hasta cerca de los 100 °C, lo que permite su uso para la inmensa mayoría de los microorganismos, que son mesófilos.

• Según la naturaleza de sus constituyentes:

Medios naturales, complejos o indefinidos

Están constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal y usualmente se complementan con el añadido de minerales y otras sustancias. No se conocen todos los componentes del medio de cultivo, ni las cantidades exactas en que están presentes. Este tipo de medio es el ideal para cuando simplemente se pretende obtener un buen crecimiento microbiológico, ya que su confección es fácil y rápida (Basta pesar una cierta cantidad del extracto desecado, suministrado por casas comerciales, disolverlo en agua y esterilizar en autoclave). Ej. Extracto de carne, extracto de levaduras.

Medios sintéticos

Se preparan a partir de ingredientes químicamente puros y por lo tanto se puede conocer exactamente su composición cuali y cuantitativa. Por su costo sólo se emplean en procedimientos especiales.

Medios “mezcla” de los anteriores

Denominado medio semisintético, llevan algunas sustancias químicas cuya naturaleza y cantidad se conoce, junto con sustancias de naturaleza y composición indefinida.

• Según sus propósitos de uso:

Medios de enriquecimiento

Se llama enriquecimiento a cualquier cultivo en medio líquido que resulte en un incremento en el número de un tipo dado de microorganismo en relación con el número de otros tipos de microorganismos que puedan estar en el inóculo. Un medio de enriquecimiento puede contener sustancias que favorezcan el crecimiento del microorganismo que nos interesa o que inhiban el crecimiento de los otros tipos de microorganismos presentes. La selectividad de un cultivo de enriquecimiento no está determinada únicamente por la composición química del medio usado, sino que en un medio dado puede ser variada significativamente modificando otros factores tales como: temperatura, pH, fuerza iónica, iluminación, aireación, etc. Ej. Caldo tetrationato utilizado para el enriquecimiento de las especies del género Salmonella provenientes de muestras de heces, orina, agua o alimentos.

Medios selectivos

Son básicamente iguales a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos específicos. Ej. Agar desoxicolato citrato utilizado para el aislamiento de patógenos entéricos.

Medios diferenciales

No contienen sustancias inhibidoras, es decir, permiten el crecimiento de muchos tipos de microorganismos, pero sí contienen indicadores de productos derivados de la actividad metabólica de los microorganismos sobre algunos de los componentes del medio. Se utilizan para la identificación de los microorganismos. Ej.: Agar base rojo fenol utilizado para detectar fermentación de carbohidratos.

Medios selectivos diferenciales

A veces se combinan en un mismo medio las características de ser selectivo y diferencial. Por ejemplo, el agar Mac Conkey, este medio contiene sales biliares y cristal violeta, que inhiben el crecimiento de las bacterias gram positivas. Pero como también contiene lactosa y un indicador de pH permite distinguir entre las bacterias fermentadoras de lactosa y las que no lo son.

Ejemplos de medios de cultivo:

·         Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de gérmenes que no presentan exigencias particulares. No es diferencial.

·         Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza además para la investigación de los diversos tipos de hemólisis (α, ß ó gamma ). Se utiliza para el crecimiento de estreptococos. Para la preparación del agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. La adición de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que están en el interior de los hematíes, pero sí puede añadir factores inhibidores del crecimiento bacteriano presentes en el suero. Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras, que son termolábiles.La sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%, pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies (caballo, conejo, humana), pues facilitan las reacciones hemolíticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados gérmenes. Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla a la media base. Por esta razón el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos ymeningococos) y Haemophilus, pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios más enriquecidos si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. Estas mezclas, denominadas de forma diferente según las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.) contienen más de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos.

·         Agar C.L.E.D.: El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrólito Deficiente) está recomendado para el recuento e identificación presuntiva de los microorganismos de las vías urinarias. Su bajo contenido en electrolitos evita la invasión de los cultivos por Proteus.La presencia de lactosa en su composición le confiere el carácter de medio diferencial, aunque la interpretación sea diferente al anterior medio por la incorporación de otro indicador: el azul de bromotimol. Las colonias lactosa positivas aparecerán de color amarillo y las lactosa negativas lo harán con un color verdoso, blanco o azulado.

·         Agar S.S.:El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales. El medio contiene sales biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y gérmenes Gram positivos. La presencia de lactosa y rojo de metilo nos permiten diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no lo hacen (incoloras).Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la lactosa por lo que este medio es excelente para descartar todas las colonias que no cumplan este requisito. El agar SS es doblemente diferencial, porque además de indicarnos el comportamiento de los gérmenes con relación a la lactosa, nos muestra los gérmenes que son capaces de producir ácido sulfhídrico, que se manifiesta como un precipitado de color negro en el centro de la colonia.

·         Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la realización de los antibiogramas o pruebas de sensibilidada los antimicrobianos. A él nos referiremos más ampliamente en el capítulo correspondiente.

·         Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de gérmenes exigentes, como Brucella, Neisseria o Streptococcus. Es un medio muy enriquecido, pero no es diferencial. Caldo tioglicolato con resazurina: Es un medio recomendado para controles de esterilidad. Permite el cultivo de aerobios, anaerobiosy microaerófilos.

·         Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos. Su elevado contenido en cloruro sódico permite la inhibición de la mayoría de los otros gérmenes. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en diferencial: así se puede identificar presuntivamente el Staphylococcus aureus, ya que estegérmen crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias amarillas).

·         Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa positivos, a la vez que los diferencia del resto.

·         Medio de Loeffler: Es un medio específico para el cultivo de Corynebacterium difteriae.

·         Agar Kligler: Medio específico para pruebas de identificación de enterobacterias. Aunque de él hablaremos conmás detenimiento en el capítulo de pruebas de identificación bacteriana, podemos ir adelantando que se tratade un medio diferencial que permite conocer el comportamiento del microorganismo ante dos azúcares (glucosa y lactosa), investigar la formación de gas y comprobar si el microorganismo puede producir sulfatoferroso a partir del tiosulfato sódico.

·         Agar Levine ó EMB (Eosina azul de metileno):Se utiliza para aislamiento de enterobacterias, pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia muy bien a E. coli, cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo metálico característico. Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para enriquecimiento de Salmonellas.

·         Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el cultivo de anaerobios.

·         Agar Gardnerella:Agar con sangre humana más una mezcla de antibióticos que permiten la observación de colonias betahemolíticas características de Gardnerella vaginalis

Técnicas de desinfección y esterilización de materiales y medios de cultivo.

Práctica No. 3

Los microorganismos como otros seres vivos, son susceptibles a los cambios de condiciones ambientales y en la medida en que se han podido adaptar a estos cambios, se han distribuido en una gran diversidad de hábitats incluyendo los de condiciones extremas sobre todo de tipo físico químico. Se han desarrollado y aplicado diversos procesos de desinfección y esterilización para limitar su presencia o eliminarlos. La esterilización es un método de eliminación total de todo tipo de organismo y que asegura la ausencia absoluta de cualquier forma viviente, mientras que la desinfección es un proceso que solamente elimina formas vegetativas de los microorganismos.

La esterilización con calor seco y húmedo son los procedimientos de mayor utilización en Microbiología. El calor seco desnaturaliza las enzimas y destruye a los microorganismos por oxidación, por ejemplo al ponerlos directamente ala flama de un mechero o en horno a 1540-180°C durante 2 horas. Estos métodos se aplican principalmente en la esterilización de asas de inoculación y todo tipo de material de vidrio y quirúrgico.

Los proceso con calor húmedo se aplican para esterilizar medios de cultivo, soluciones, y cultivos bacterianos que se desechan, el más recomendable es el autoclave en el que se utiliza vapor de agua a presión para alcanzar temperaturas de 121°C. El material se deja a esta temperatura durante 15 minutos para asegurarse de la destrucción de endosporas, que son las estructuras bacterianas más resistentes al calor.

Cuando se requiere esterilizar diferentes materiales sensibles al calor como las soluciones de vitaminas, aminoácidos, etc. Se esterilizan por filtración en membranas estériles de 0.2 micras de diámetro y para el caso de materiales plásticos es recomendable el uso de gases como óxido de etileno o con radiaciones gamma. Las superficies generalmente se desinfectan con radiaciones U.V. o compuestos químicos en forma líquida como: los fenoles, compuestos cuaternarios de amonio (alquildimetil bencilamonio), formaldehído, alcoholes, halógenos y detergentes.

Es importante mantener la asepsia en el laboratorio, y protegerse al maximo, con cubrebocas, bata, gorro, lentes, guantes, para evitar lo mas que se pueda el contacto con las bacterias.

Como sabemos el horno es un equipo muy usado para la esterilizacion de los materiales usados en microbiologia.

La caja de petri es uno de los materiales mas usados en el laboratorio de microbiologia y mas específicamente en los medios de cultivos, junto a los tubos de ensaye.

• Preparación del material de vidrio y medios de cultivo

1. Lavar perfectamente las cajas de Petri y pipetas con escobillón y

detergente. Enjuagar con abundante agua corriente.

2. Escurrir el exceso de agua y enjuagar el material con agua destilada con

una pipeta, por las paredes interiores. Dejar escurrir el material sobre una

toalla o papel de envoltura. No debe secar el material por ningún otro

medio.

3. Una vez seco el material, se procederá a envolver las cajas de Petri y

pipetas con papel de estraza. Para los tubos y matraces se elaborarán

tapones de algodón y gasa, procurando que ajusten con holgura, sobre los

que finalmente se les colocará un capuchón de papel.

4. Preparar 120 mL de Agar Nutritivo (AN), calentar la mezcla en una parrilla

con agitación constante hasta ebullición, durante 1 minuto ( cuidar que no

se proyecte), el medio se esteriliza en el autoclave.

5. Preparar 120 mL de medio de cultivo Papa dextrosa agar ( PDA) en un

matraz Erlenmeyer de 250 mL, ajustar el pH del medio a 501-5.6. colocar

un magneto de agitación y calentar hasta ebullición durante 1 minuto;

cuidando de que no se proyecte o derrame. el medio se esteriliza en el

autoclave.6. 

• Esterilización de materiales y medios de cultivo

1. Las cajas de Petri y pipetas envueltas se colocarán en horno a 150°C

durante 2 horas. Después de sacarlas, dejarlas enfriar y abrir los paquetes

únicamente en área aséptica. O esterilizarlas en el autoclave.

2. Los medios de cultivo se esterilizarán en autoclave de acuerdo a las

siguientes instrucciones:

a. Revisar que el nivel de agua coincida con la marca en el tubo indicador. En

caso necesario añadir agua destilada.

b. Conectar la autoclave y poner la perilla de control en calentamiento alto.

Acomodar los medios y materiales en la canasta del autoclave y colocarla

dentro.

c. Cerrar la puerta, apretar las manijas de dos en dos en posición encontrada

y esperar a que salga el vapor de agua por el orificio de purgado. Después

cerrar este orificio con la válvula de seguridad.

d. Dejar que el equipo se caliente hasta alcanzar los 121°C o 15 lbs de

presión revisando continuamente la escala del manómetro. Una vez

alcanzada esta temperatura deberá bajarse el nivel de calentamiento

moviendo la perilla de control al nivel medio o bajo.

e. Mantener el equipo en estas condiciones durante 15 minutos.

f. Apagar la autoclave y dejar que baje la presión al valor de “0”. Quitar la

válvula de seguridad y con la ayuda de guante de abesto o una jerga

húmeda abrir cuidadosamente la puerta, de adelante hacia atrás para evitar

quemaduras por la salida del vapor.

• Preparación de las cajas de Petri con medios de cultivo

1. Dejar que los medios de cultivo en matraces que se han sacado de

la autoclave se enfríen a una temperatura aproximada de 40-50 °C,

que coincide con la posibilidad de sostener el matraz en la palma de

la mana sin sentir un calor excesivo.

2. Cerca del mechero etiquetar 3 cajas con AN, 3 con PDA y 3 con MM

o EMB. Los medios de cultivo se vacían en las cajas de Petri

(aproximadamente 25-30 mL) en zona aséptica cerca del mechero o

en campana de flujo laminar.

3. Dejar que solidifiquen los medios (por lo menos 30 minutos) y

posteriormente envolver las cajas cuidadosamente con papel estraza

o acomodarlas en forma invertida en bolsas de plástico limpias.

4. Guardarlas en refrigeración hasta 24 horas antes de utilizarlas.

• Prueba de esterilidad de materiales

1. Colocar las cajas de Petri en forma invertida en una estufa de incubación

ajustada a 30°C durante 24-48 horas.

2. Revisar los tubos y cajas de Petri para detectar la presencia de

contaminantes, así como la formación de colonias microbianas en la

superficie de medios sólidos.

3. Si no hay contaminación de los medios, se abrirá una de las cajas de Petri

de cada medio durante 1 minuto en el laboratorio o zonas accesorias al

mismo y se etiquetará como “al aire”.

4. La otra caja de cada medio de cultivo se abre durante 30 segundos cerca

del mechero y se etiquetará “en área aséptica”.

5. La tercer caja se conservará sin abrir y se etiqueta como “control”.

Práctica No.2

Colorantes, mordientes  e indicadores

Los colorantes utilizados en Microbiología son compuestos orgánicos que contienen grupos cromóforos y auxocromos unidos a anillos aromáticos.
La presencia de grupos cromóforos en una molécula (grupos azo, nitro, etc.) no es suficiente para que ésta actúe como colorante, esto es que se fije a las estructuras a colorear. Para ser colorante debe poseer grupos que sean capaces de disociarse llamados auxocromos. Por ejemplo el 1, 3,5 trinitrobenceno, es un compuesto coloreado pero no es un colorante. Sin embargo, si se remplaza un H por un OH en el anillo bencénico, se obtiene el ácido pícrico que también es coloreado pero al poseer un grupo disociable (auxocromo) actúa como colorante.
La distinción entre colorantes ácidos y básicos depende de la carga de la parte de la molécula responsable del color. Si es negativa se trata de un colorante ácido y si es positiva se trata de un colorante básico. Esta diferencia es importante debido a que, según sean ácidos o básicos, los colorantes tendrán afinidad por diferentes zonas de la anatomía celular.

Algunos colorantes utilizados comúnmente en Microbiología son fucsina básica, cristal violeta, safranina, azul de metileno, etc.

• Los pasos fundamentales previos a una coloración son: extendido, secado y fijado. 

a) Extendido: se coloca una pequeña porción de la muestra en un portaobjetos y se extiende con el ansa en forma de óvalo. Para muestras provenientes de medios sólidos, debe colocarse previamente una gota de agua sobre el portaobjetos.

b) Secado: puede dejarse secar el extendido a temperatura ambiente, o colocar a 30-40 cm sobre la llama del mechero.

c) Fijado: la fijación tiene como finalidades evitar el desprendimiento del preparado durante la coloración así como también preservar la forma original de los microorganismos.


El procedimiento más común es pasar el preparado 3 veces por la llama del mechero. Sin embargo, esta técnica no es conveniente para ciertas coloraciones para las cuales deben utilizarse procedimientos más suaves. Algunos agentes fijadores utilizados son etanol, metanol, formol, sales de mercurio, tetróxido de osmio, ácido pícrico, etc. Debe tenerse en cuenta que, luego del procedimiento de coloración, los preparados pueden contener microorganismos viables, en especial si hay esporas. Por consiguiente siempre deben considerarse como potencialmente riesgosos y manejarse con precaución.
La fenolftaleína es un compuesto químico orgánico que se obtiene por reacción del fenol (C6H5OH) y el anhídrido ftálico (C8H4O3), en presencia de ácido sulfúrico.
En farmacología y terapéutica se utiliza como laxante catar. En México y otros países, a pesar de que se ha limitado su uso como medicamento dada la suposición de que tiene efectos cancerígenos, fue incorporado a la farmacopea homeopática y se sigue vendiendo en las farmacias como especialidad homeopática.
En análisis clínicos, la fenolftaleína se utiliza como agente de diagnóstico para investigar la función renal y en la determinación de orina residual en la vejiga. Aquí se usa una forma inyectable del fármaco. Igualmente en microbiología este compuesto químico presente en la forma de difosfato de fenolftaleína es utilizado como componente para la identificación de bacterias específicas (fosfatasa ácida positivas) en algunos medios de cultivos selectivos.

• Preparación de tinción de Gram.

•        Colorante Cristal violeta

• Tetrametilo (cuatro metilos) es conocido como Violeta de metilo 2B, y encuentra usos específicos en química y medicina.

• Pentametilo (cinco metilos) es conocido como Violeta de metilo 6B, y es más oscuro como colorante que 2B.

• Hexametilo (seis metilos) es conocido como Violeta de metilo 10B, o específicamente violeta cristal. Es mucho más oscura que la 2B, y aún más oscura que la 6Bk

•        Violeta de Genciana 

El violeta de metilo, comúnmente denominado cristal violeta o violeta de genciana, es el nombre dado a un grupo de compuestos químicos empleados como indicadores de pH y colorantes.

•              Solución Lugol

•            Solución alcohol –cetona   

•               Colorante Safranina

La safranina (también llamada Safranina O o rojo básico 2), es un colorante biológico, de contraste que se utiliza en la Tinción de Gram para proporcionar un color violeta más intenso a las bacterias Gram+ y tiñe de rosa a las bacterias G- ; en histología y en citología. La safranina se usa como líquido de contraste en algunos protocolos de tinción, coloreando el núcleo celular de rojo. También para detectar cartílago, mucina y gránulos de mastocitos.

•                Preparación de la fenolftaleína .

La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en Bacteriología para la visualización debacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color morado, y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella

El violeta de metilo, comúnmente denominado cristal violeta o violeta de genciana, es el nombre dado a un grupo de compuestos químicos empleados como indicadores de pH y colorantes.

Los violetas de metilo son mezclas de: N-tetra, N-penta y N-hexametil p-rosanilinas. Por la mezcla de diferentes versiones, el fabricante puede crear diferentes tonos de violeta en el colorante final. Cuanto más metilado esté el colorante, su color será de un violeta más oscuro:

El lugol o disolución de Lugol es una disolución de yodo molecular I2 y yoduro potásico KI en agua destilada. Se preparó por primera vez en 1829 y recibe su nombre en honor al médico francés J.G.A. Lugol

Este producto se emplea frecuentemente como desinfectante y antiséptico, para la desinfección de agua en emergencias y como un reactivo para la prueba del yodo en análisis médicos y de laboratorio.

También se ha usado para cubrir deficiencias de yodo; sin embargo, se prefiere el uso de yoduro potásico puro debido a la ausencia de yodo diatómico, forma molecular cuyo consumo puede resultar tóxico.

Medir  Un volumen de Acetona  por dos volúmenes de Etanol de 95° y guardar en un frasco color mbar y etiquetar.

La fenolftaleína de fórmula (C₂₀H₁₄O₄) es un indicador de pH que en disoluciones ácidas permanece incoloro, pero en presencia de bases toma un color rosado con un punto de viraje entre pH=8,0 (incoloro) a pH=9,8 (magenta o rosado).

Es un compuesto químico orgánico que se obtiene por reacción del fenol (C₆H₅OH) y el anhídrido ftálico (C₈H₄O₃) en presencia deácido sulfúrico.

PRACTICA 1. “IDENTIFICACIÓN DE LOS MATERIALES EN EL LABORATORIO MICROBIOLOGICO.

Un laboratorio de Microbiología es un lugar habilitado para manejar y estudiar microorganismos. El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estándares técnicos y de seguridad propios de un laboratorio de Microbiología Clínica.

Es importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos presentes en la muestra por lo que es preciso extremar las precauciones para evitar contaminaciones que den lugar a resultados erróneos. Todas las muestras deben ser manejadas con precaución por su potencial patogenicidad. Para deshacerse del material contaminado se deben utilizar recipientes adecuados que deben ser esterilizados posteriormente.

Nunca se puede tirar nada contaminado por el fregadero o al cubo de la basura común sin haber sido esterilizado previamente.

El laboratorio deben existir unas recomendaciones generales de limpieza y en caso de vertidos:

Procedimientos de limpieza de superficies externas mediante papel humedecido con solución desinfectante (alcohol 70%, desinfectante fenólico diluido, etc.). Aclarar con agua los restos de desinfectante. En caso de usar soluciones de hipoclorito en zonas metálicas, limpiar posteriormente para evitar el efecto corrosivo.

En caso de derramamientos de material peligroso o formación de aerosoles: evitar inspiraciones de esos aerosoles, esperar 30 minutos hasta que las partículas se hayan depositado y limpiar con mascarilla, guantes y otros útiles protectores. En caso de vertido de materiales, cubrir la superficie con desinfectante y posteriormente cubrir con papel humedecido con desinfectante. Dejar durante 15 minutos y limpiar. En caso necesario aclarar con agua.

En caso de derramamientos menores limpiar el material vertido mediante papel humedecido y posteriormente aclarar, cuando sea necesario.

Los laboratorios deberán disponer de los aparatos e instrumental necesario para el correcto desarrollo de su actividad.

Debe existir un procedimiento de control de calidad en el laboratorio de Microbiología Clínica que implique la monitorización de los medios e instrumentos, con el fin de asegurar la adecuada realización de los aislamientos, identificación y caracterización de los patógenos y la realización precisa de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos como referencia terapéutica. El sistema de la calidad deberá contemplar la existencia de registros de formación de personal. Es imprescindible la existencia de un procedimiento sobre medidas de protección personal en el manejo de equipos y aparatos. Los equipos del laboratorio deben funcionar de forma que se asegure la reproducibilidad de los resultados de las pruebas diagnósticas.

El laboratorio deberá estar bajo la dirección y responsabilidad de un facultativo con la especialidad correspondiente, legalmente capacitado para realizar aquéllas determinaciones clínicas que el laboratorio tenga autorizadas.

El personal técnico y sanitario del laboratorio deberá disponer la titulación adecuada para las funciones que desarrolla de conformidad con la legislación vigente.

Elementos y materiales de un laboratorio de Microbiología

• Mesas de laboratorio y fregadero

•   Vitrinas y armarios

• Mechero Bunsen

• Gradillas

•         Estufa de incubación

• Frigorífico o cámaras refrigeradas

•   Microscopio óptico

• Centrífuga

• Contador de colonias

• Balanza

•    Baños termostáticos:

• Agitador/ mezclado

• Jarras de anaerobios

• Asas de siembra

• Tubos con medio sólido

• Portas y cubres

• Cucharas y espátulas:

•  Horno de Pasteur:

• Placas de Petri

CUESTIONARIO

1. ¿Qué son las cianobacterias?
   Las cianobacterias son un filo del dominio Bacteria que comprende las bacterias capaces de realizar fotosíntesis oxigénica y, en algún sentido, a sus descendientes por endosimbiosis, los plastos. Son las únicas procariotas que llevan a cabo ese tipo de fotosíntesis, por ello también se les denomina oxifotobacterias.
2. ¿Por qué se le llama a la célula procariota?
   Se llama procariota a las células sin núcleo celular definido, es decir, cuyo material genético se encuentra disperso en el citoplasma, reunido en una zona denominada nucleoide. Por el contrario, las células que sí tienen un núcleo diferenciado del citoplasma, se llaman eucariotas, es decir aquellas cuyo ADN se encuentra dentro de un compartimiento separado del resto de la célula.
3. ¿Por qué se le llama a la célula eucariota?
   Se llama célula eucariota  a todas las células con un núcleo celular delimitado dentro de una doble capa lipídica: la envoltura nuclear, la cual es porosa y contiene su material hereditario, fundamentalmente su información genética.
4. Describe las diferencias en una tabla de la célula eucariota y la procariota.
   
5. ¿Qué son las arqueobacterias?
   Las Archaea, arqueas o arqueobacterias son un grupo de microorganismos unicelulares de morfología procariota (sin núcleo ni, en general, orgánulos membranosos internos), que forman uno de los tres grandes dominios de los seres vivos, y que son diferentes de las bacterias.
6. ¿Qué características tienen las arqueobacterias?
   Las arqueobacterias son organismos procariotas; como tal son células que no poseen un núcleo celular definido ni tampoco algunos orgánulos en su interior. Anteriormente se les consideraba bacterias atípicas, es decir, poco comunes. Sin embargo, diversos estudios han permitido demostrar que tienen bastantes diferencias bioquímicas, lo cual ha permitido clasificar las células en tres dominios diferentes: las arqueas, las bacterias y los eucariotas.
7. ¿Qué son las bacterias?
   Las bacterias son microorganismos procariotas que presentan un tamaño de unos pocos micrómetros (por lo general entre 0,5 y 5 μm de longitud) y diversas formas incluyendo filamentos, esferas (cocos), barras (bacilos), sacacorchos (vidrios) y hélices (espirilos). Las bacterias son células procariotas, por lo que a diferencia de las células eucariotas (de animales, plantas, hongos, etc.), no tienen el núcleo definido ni presentan, en general, orgánulos membranosos internos. 
8. ¿Qué son las eubacterias?
   Las bacterias son microorganismos procariotas que presentan un tamaño de unos pocos micrómetros (por lo general entre 0,5 y 5 μm de longitud) y diversas formas incluyendo filamentos, esferas (cocos), barras (bacilos), sacacorchos (vidrios) y hélices (espirilos). Las bacterias son células procariotas, por lo que a diferencia de las células eucariotas (de animales, plantas, hongos, etc.), no tienen el núcleo definido ni presentan, en general, orgánulos membranosos internos.
9. ¿Qué beneficios trae a la medicina la eubacteria?
   Muchas industrias dependen en parte o enteramente de la acción bacteriana. Gran cantidad de sustancias químicas importantes como alcohol etílico, ácido acético, alcohol butílico y acetona son producidas por bacterias específicas. También se emplean bacterias para el curado de tabaco, el curtido de cueros, caucho, algodón, etc. Las bacterias junto con levaduras y mohos, se han utilizado durante miles de años para la preparación de alimentos fermentados tales como queso, mantequilla, encurtidos, salsa de soja, chucrut, vinagre, vino y yogur.
10. ¿Cuáles son las bacterias de beneficio para la salud?
    - Las bacterias del ÁCIDO LÁCTICO incluyen, entre otras, las especies de los géneros Streptococcus y Lactobacillus que producen yogur.
    - Las bacterias RHIZOBIUM que se asocian con un grupo muy grande de plantas leguminosas (chaucha, arveja, poroto, maní, lenteja, soja).
    -LACTOBACILLUS, Bacterias Beneficiosas ya que intervienen en el proceso de transformar el vino en vinagre y de la leche en yogur.
    - La Bacteria ACIDI LACTICI que cuaja la leche.
    - La ESCHERICHIA COLI es una bacteria beneficiosa para el hombre ya que ayuda a metabolizar los alimentos en el proceso de la digestión. Vive en SIMBIOSIS con el organismo huésped ayuda a la síntesis de vitamina K y en algunos casos la B12.
11. ¿Qué bacterias son las que abundan en la corteza de los arboles, rocas y suelos húmedos?
    Eubacterias; ellos viven en el agua, el suelo húmedo, en las plantas, e incluso por un momento preguiça.as el agua de una presa se ​​vuelve verdoso, porque aumenta el número de algas en gran medida.
    Cianobacterias; puede convertir en sales de nitrógeno gaseoso de nitrógeno absorbida del suelo por las plantas
12. ¿Qué son las levaduras?
    Se denomina levadura a cualquiera de los diversos hongos microscópicos unicelulares que son importantes por su capacidad para realizar la descomposición mediante fermentación de diversos cuerpos orgánicos, principalmente los azúcares o hidratos de carbono, produciendo distintas sustancias.
13. ¿Qué son los hongos?
    Los hongos son un grupo de seres vivos diferentes de las plantas y de los animales, razón por la cual se clasifican en un reino aparte llamado Fungi. La ciencia que los estudia se llama Micología. Poseen gran capacidad de adaptación y pueden desarrollarse sobre cualquier medio o superficie, tanto en los bosques como en las ciudades. Se reproducen por medio de esporas, las cuales son diseminadas principalmente por el viento y por el agua.
14. ¿Qué son los líquenes?
    Los líquenes son organismos que surgen de la simbiosis entre un hongo llamado micobionte y un alga o cianobacterias llamada ficobionte.

ESTRUCTURA DE UNA BACTERIA

MORFOLOGÍA DE LAS COLONIAS BACTERIANAS